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高通量測(cè)序平臺(tái)
環(huán)介鏈接擴(kuò)增技術(shù)RingCap?(Ring-Link Capture Library technology)系飛朔生物自主研發(fā)專利技術(shù)(專利號(hào):ZL 2015 1 0496049.5),是一種基于多重PCR 的靶向測(cè)序文庫(kù)制備技術(shù),克服了長(zhǎng)期困擾著基于PCR技術(shù)的靶向文庫(kù)制備中的許多限制,如槽糕的序列均一性,丟失的靶標(biāo)序列,繁復(fù)的實(shí)驗(yàn)流程,冗長(zhǎng)的人工操作時(shí)間,以及高昂的前期設(shè)備投入。
RingCap?能夠?qū)崿F(xiàn)一步進(jìn)行高通量測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建,具體步驟如下:
v 針對(duì)若干目的基因分別設(shè)計(jì)若干對(duì)基本擴(kuò)增引物,實(shí)現(xiàn)對(duì)靶序列進(jìn)行擴(kuò)增捕獲;
v 設(shè)計(jì)一對(duì)不對(duì)稱連接探針,該探針中含有一段不與人類基因組形成互補(bǔ)的特異性序列,通過不對(duì)稱連接探針與上述捕獲到的靶序列特異性連接,形成環(huán)形產(chǎn)物;
v 設(shè)計(jì)一不與人類基因組形成互補(bǔ)的通用引物,特異性的擴(kuò)增上述環(huán)形產(chǎn)物中的互補(bǔ)序列;
v 將擴(kuò)增產(chǎn)物純化后,即得所述高通量測(cè)序文庫(kù)。
技術(shù)平臺(tái) | RingCap?技術(shù)平臺(tái) | VS | 其它常用文庫(kù)構(gòu)建平臺(tái) |
操作步驟 | 二步 | 8-17步 | |
操作時(shí)間 | 3.5小時(shí) | 8-24小時(shí) | |
人工操作時(shí)間 | 45分鐘 | 4-8小時(shí) | |
檢測(cè)樣本量 | 5-20ngDNA或RNA | 1-100ng DNA或RNA |
RingCap?技術(shù)流程圖
——僅供科研使用——